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摘要轉(zhuǎn)染SCF基因至NK細胞系,探討其對細胞增殖、細胞毒性及遷移能力的影響。采用威尼德電穿孔儀完成基因?qū)耄Y(jié)合流式細胞術(shù)、CCK-8法和Transwell實驗評估功能變化。結(jié)果顯示,SCF轉(zhuǎn)染顯著增強NK細胞增殖活性(p引言自然殺傷(NK)細胞作為先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在腫瘤免疫監(jiān)視和抗病毒感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用。然而,NK細胞在體外擴增效率低、存活時間短等問題限制了其臨床應用。干細胞因子(SCF)是一種多功能細胞因子,通過與c-Kit受體結(jié)合,參與造血干細胞存活、增殖及...
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摘要雙順反子表達載體,實現(xiàn)兩種功能基因的協(xié)同表達,并優(yōu)化細胞轉(zhuǎn)染與分選流程。利用威尼德電穿孔儀完成高效轉(zhuǎn)染,結(jié)合熒光標記與流式分選技術(shù),驗證載體在哺乳動物細胞中的表達效率。實驗結(jié)果表明,雙順反子載體顯著提高共表達效率,為多基因功能研究提供可靠工具。引言雙順反子載體因其可同時表達多個基因的特性,在基因治療、信號通路研究及合成生物學領(lǐng)域備受關(guān)注。傳統(tǒng)單順反子載體需多次轉(zhuǎn)染或復雜拼接,效率低且穩(wěn)定性差。本研究旨在設(shè)計一種基于內(nèi)部核糖體進入位點(IRES)或自切割多肽(P2A)的雙順...
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摘要cMet基因的siRNA慢病毒載體,并通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染篩選獲得高效抑制cMet表達的細胞模型。實驗采用分子克隆技術(shù)設(shè)計特異性siRNA序列,利用威尼德電穿孔儀完成病毒包裝,經(jīng)熒光標記篩選及Westernblot驗證,成功獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。結(jié)果顯示,cMet蛋白表達顯著降低,為后續(xù)功能研究提供了可靠工具。引言cMet基因編碼的肝細胞生長因子受體(HGFR)在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其異常激活與多種癌癥不良預后密切相關(guān),因此靶向cMet的基因沉默技術(shù)成為研究熱點。...
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摘要:分子克隆技術(shù)構(gòu)建人CD160基因過表達載體,利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染HEK293T及Jurkat細胞系,篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。通過流式細胞術(shù)、CCK-8增殖實驗及Transwell遷移模型系統(tǒng)分析CD160對細胞增殖、凋亡及遷移能力的影響。結(jié)果顯示CD160過表達顯著抑制T淋巴細胞活化并促進腫瘤細胞遷移,Westernblot證實其通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路發(fā)揮作用,為免疫調(diào)控機制研究提供新模型。引言:CD160作為免疫球蛋白超家族成員,在T/B淋巴細胞表面特異性...
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摘要蝎毒多肽對慢性粒細胞白血病(CML)細胞中BCR-ABL融合基因的抑制作用及其分子機制。通過體外細胞實驗結(jié)合分子生物學技術(shù),發(fā)現(xiàn)蝎毒多肽可顯著下調(diào)BCR-ABLmRNA及蛋白表達,誘導細胞凋亡并抑制增殖,其作用可能與調(diào)控PI3K/AKT信號通路相關(guān)。實驗采用威尼德電穿孔儀、紫外交聯(lián)儀等設(shè)備,為靶向治療CML提供潛在策略。引言慢性粒細胞白血病(CML)是一種由BCR-ABL融合基因驅(qū)動的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,其異常激活的酪氨酸激酶活性導致細胞增殖失控。目前,酪氨酸激酶抑制劑(T...
3-14
摘要基因表達譜芯片技術(shù),系統(tǒng)分析β干擾素轉(zhuǎn)染人源細胞后反式調(diào)節(jié)基因的表達變化。通過威尼德電穿孔儀實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染,結(jié)合威尼德分子雜交儀完成基因表達譜檢測,篩選出差異表達基因并進行功能富集分析。實驗驗證表明,β干擾素顯著調(diào)控多個參與免疫應答和信號轉(zhuǎn)導的基因,為闡明其抗病毒及免疫調(diào)節(jié)機制提供了新依據(jù)。引言β干擾素(IFN-β)是一類具有抗病毒、抗增殖及免疫調(diào)節(jié)功能的多效細胞因子,其生物學效應主要通過激活JAK-STAT信號通路并誘導下游基因表達實現(xiàn)。然而,β干擾素對細胞基因組的全局性...
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摘要人巨細胞病毒(HCMV)基因重組質(zhì)粒,利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染人成纖維細胞,結(jié)合熒光定量PCR、Westernblot及共聚焦顯微技術(shù),系統(tǒng)分析HCMV在基因編輯細胞中的復制動態(tài)。結(jié)果顯示,HCMVIE2蛋白顯著調(diào)控病毒DNA合成,且宿主細胞NF-κB信號通路參與復制調(diào)控。HCMV致病機制提供了新視角。引言人巨細胞病毒(HCMV)是一種廣泛傳播的β-皰疹病毒,可引發(fā)免疫功能低下患者嚴重并發(fā)癥。其復制機制復雜,涉及病毒基因與宿主因子的多重互作。近年研究表明,病毒立即早期蛋白(...
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摘要白蛋白微泡的理化特性,系統(tǒng)探討其介導心肌細胞報告基因轉(zhuǎn)染的機制。實驗利用威尼德電穿孔儀制備微泡載體,結(jié)合某試劑構(gòu)建熒光素酶報告質(zhì)粒,分析不同參數(shù)對轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果表明,微泡粒徑與聲場強度的協(xié)同作用顯著提升基因遞送效率,為心肌細胞靶向治療提供了新思路。引言心肌細胞再生能力有限,基因治療為其功能修復提供了潛在策略。然而,傳統(tǒng)病毒載體存在免疫原性風險,非病毒遞送系統(tǒng)則面臨轉(zhuǎn)染效率低的技術(shù)瓶頸。白蛋白微泡因生物相容性優(yōu)異且可響應超聲空化效應釋放基因,逐漸成為研究熱點。既往研究...