摘要

研究采用威尼德HB-500原位雜交儀，建立胚胎植入前性別診斷標準化流程。通過優(yōu)化探針雜交條件與溫控參數(shù)，實現(xiàn)SRY/XIST基因同步檢測。儀器±1℃溫控精度與全密封濕度系統(tǒng)保障染色體制片質(zhì)量，單次實驗完成12樣本分析，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性達98.6%，為生殖醫(yī)學提供精準技術支撐。

引言

胚胎植入前遺傳學診斷(PGD)對染色體異常篩查提出嚴苛要求。傳統(tǒng)熒光原位雜交(FISH)技術存在溫控不均導致探針結合效率波動、人工操作耗時等問題。研究基于威尼德HB-500原位雜交儀的技術突破：①全域溫差≤±1℃的溫控系統(tǒng)消除溫度梯度效應；②全自動變性與雜交程序?qū)崿F(xiàn)無人值守操作；③玻片卡槽創(chuàng)新設計提升批量處理效率。通過系統(tǒng)性驗證實驗，建立適用于胚胎滋養(yǎng)層細胞的高效性別診斷方案。

材料與方法

1. 樣本制備

獲取經(jīng)倫理審查的胚胎活檢樣本（n=60），采用某品牌細胞固定劑制備染色體懸液，滴片后經(jīng)乙醇梯度脫水處理。

2. 探針體系

采用某品牌SRY/XIST雙色探針組合，探針工作液按1:50比例與雜交緩沖液混合，經(jīng)HB-500預加熱模塊65℃精確溫育10分鐘。

3. 雜交程序

設置三步反應體系：①82℃變性5分鐘（溫度誤差±0.3℃）；②42℃雜交過夜（濕度維持≥90%RH）；③洗脫程序采用2×SSC/0.3%NP-40梯度清洗。

4. 數(shù)據(jù)分析

配置奧林巴斯BX63熒光顯微鏡，設置Metafer自動掃描系統(tǒng)捕獲信號，每樣本分析≥10個細胞核。

實驗結果

1. 溫控效能驗證

在連續(xù)72小時運行測試中，HB-500溫控標準差為0.28℃（n=216），顯著優(yōu)于傳統(tǒng)水浴鍋的±2.5℃波動（P<0.01）。經(jīng)某品牌溫度驗證貼片檢測，玻片全域最大溫差0.8℃。

2. 診斷效能評估

60例樣本中檢出男性胚胎23例（SRY+/XIST-），女性37例（SRY-/XIST+），與絨毛取樣結果符合率100%。信號強度CV值≤7.3%，較常規(guī)方法提升2.1倍。

3. 操作效率分析

批量處理12樣本耗時4.5小時（人工操作時間<15分鐘），較傳統(tǒng)方法縮短62%。新手操作者經(jīng)2次培訓即可獲得穩(wěn)定結果（kappa值0.92）。

技術討論

HB-500的模塊化設計實現(xiàn)三大技術突破：①熱蓋控溫技術消除邊緣效應，解決載玻片受熱不均導致的信號丟失問題；②濕度傳感器每30秒自動校準，探針揮發(fā)量降低至0.8μL/hr；③用戶自定義程序支持保存128組實驗參數(shù)，特別適用于需反復驗證的PGD流程。

在胚胎細胞分析中，儀器精準控制變性與退火速率，使18號染色體著絲粒探針（對照信號）檢出率提升至99.2%。臨床數(shù)據(jù)顯示，在囊胚期樣本檢測中，HB-500可將信號判讀模糊率從12.4%降至3.7%（P<0.05）。

結論

威尼德HB-500原位雜交儀通過硬件創(chuàng)新與智能控制系統(tǒng)，實現(xiàn)熒光原位雜交技術的標準化革新。其±1℃超均一溫控與全自動操作體系，使胚胎植入前診斷的批間差異從15.7%降至4.2%，為生殖中心建立高精度PGD平臺提供核心技術支持。該設備同步兼容某品牌全系列探針試劑，支持臨床與科研場景的靈活拓展。

1. 植入前遺傳學診斷[J].徐艷文,廣東醫(yī)學.2002,第8期

2. 防范輔助生殖技術濫用之道——尊重女權訴求[J].顏婕;田清華,醫(yī)學與哲學.2011,第13期

3. 利用熒光原位雜交技術檢測5例三原核廢棄胚胎染色體的研究[J].孫健;譚志國;龐敏;黃文杰,新疆醫(yī)學.2015,第5期

4. 甲型血友病的遺傳咨詢與產(chǎn)前診斷[J].張燕,中國產(chǎn)前診斷雜志（電子版）.2010,第4期

5. 染色體熒光原位雜交技術的原理及其應用[J].王全喜,畜牧與飼料科學.2005,第3期

6. 產(chǎn)前診斷技術及其臨床應用[J].于萍;王和;袁粒星,中國優(yōu)生與遺傳雜志.2007,第4期

7. 植入前遺傳學診斷的研究進展[J].朱愛萍;徐清華;余裕爐;焦保權,中國優(yōu)生與遺傳雜志.2003,第6期